烟草在线据中国农科院烟草所网站报道 为积极追踪科学技术前沿,努力强化团队成员业务水平,8月2日,中国农科院烟草所栽培与调制创新团队特邀罗氏生命科学应用技术部资深工程师传授“荧光定量PCR实验技术”。
工程师系统全面地介绍了荧光定量PCR的技术原理、应用领域、操作规范、分析方法、注意事项及常见问题,针对团队研究任务,就如何做好实验设计、方法选择、条件优化等进行了系统讲解和互动交流,并通过最新发表的烟草相关实验案例分析和现场实验演示,进一步强化大家对该技术的理解。
大家一致认为,本次培训设计科学、深入浅出、针对性强,使参训人员系统地掌握了荧光定量PCR的基础技术,了解了该技术的应用前沿与发展动态,掌握了实验条件优化方法,规范了实验操作,为更好地解决实验中存在的问题,更准确地获得科学的实验结果奠定了良好的基础。
延伸阅读
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,该技术通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,用相应软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
荧光定量PCR技术以Taqman荧光探针为基础,Taqman荧光探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团(常用荧光基团是FAM, TET, VIC, HEX)。探针完整时,发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步,从而实现定量。
荧光定量PCR的出现,极大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现,使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合,荧光定量PCR在各个领域应用前景广阔。
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